人牙周膜干细胞
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一、细胞基本属性 |
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细胞名称
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人牙周膜干细胞 |
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组织来源
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牙周膜组织 |
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商品货号
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ORCH431 |
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种属来源
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人 |
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产品规格
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5×105cells/T25细胞培养瓶 |
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细胞简介
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人牙周膜干细胞分离自牙周膜组织; 牙周膜(牙周韧带、牙周间隙)是由致密结缔组 织所构成。多数纤维排列成束, 纤维的一端埋于牙骨质内,另一端则埋于牙槽窝 骨壁里,使牙齿固位于牙槽窝内;牙周膜内有神经、血管、淋巴和上皮细胞等。 成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分, 由胚胎时期的间充质细 胞分化而来。间充质干细胞(mesenchymal stem cells , MSCs)来源于胚胎时期 的中胚层组织, 具有很强的自我复制和多向分化潜能,具有向脂肪细胞、成骨细 胞、软骨细胞及肌细胞等多种终末细胞定向分化的能力,运用 MSCs来修复软骨 损伤具有很好的应用前景,目前已能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等组织 以及羊水、脐带、脐带血中分离和制备间充质干细胞。牙周膜干细胞参与了牙周 组织的病变、修复及再生过程。现在,利用牙周膜干细胞建立体外模型,已经成 为有关员研究牙周组织疾病的重要手段。 |
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培养基
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原代间充质干细胞培养体系 |
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换液频率
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每2-3天换液一次 |
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生长特性
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贴壁 |
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成纤维细胞样 |
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传代特性
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细胞特性确定传代 |
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消化液
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0.25%胰蛋白酶 |
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培养条件
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气相:空气,95%;CO2,5% |
质量检测:澳睿赛实验室分离的人牙周膜干细胞经CD44免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上, 且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人牙周膜干细胞体外培养周期有限;建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用PBS清洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;
3)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大,无法机械吹散时,向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中,用吸-管轻轻吹打混匀,37°C温浴2-3min,消化结束后,加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化,用吸管轻轻吹打,分散细胞;1200rpm离心5min,弃上清,收集细胞沉淀;
5)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀;按传代比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和澳睿赛技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考
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