人肾足细胞
| 一、细胞基本属性 |
| 细胞名称 |
人肾足细胞 |
| 组织来源 |
肾脏组织 |
| 商品货号 |
ORCH407 |
| 种属来源 |
人 |
| 产品规格 |
5×105cells/T25细胞培养瓶 |
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细胞简介
|
肾小球为血液过滤器,肾小球毛细血管壁构成过滤膜。肾小球过滤膜从内到外有 三层结构: 内层为内皮、中层为肾小球基膜、外层为上皮细胞层, 上皮细胞又称 足细胞,其不规则突起称足突, 其间有许多狭小间隙,血液经滤膜过滤后, 滤液 入肾小球囊。在正常情况下,血液中绝大部分蛋白质不能滤过而保留于血液中, 仅小分子物质如尿素、葡萄糖、电解质及某些小分子蛋白能滤过。 肾足细胞即肾 小球上皮细胞, 它附着于肾小球基底膜的外侧,连同肾小球基底膜和肾小球基膜 一起构成了肾小球血液滤过屏障。又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末 分化细胞, 体外培养的原代细胞不能增殖。足细胞呈星型多突状, 胞体较大,由 胞体伸出许多突起, 呈指状交叉覆盖于肾小球基底膜外表面, 并通过黏附分子和 蛋白多糖分子与肾小球基底膜相连。足细胞在正常情况下可以分泌肾小球基底膜 的主要组成成分IV型胶原和纤维连接蛋白,在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具 有降解肾小球基底膜作用的基质金属蛋白酶和组织蛋白酶,从而在肾小球基底膜 的代谢平衡中发挥重要作用。 |
| 培养基 |
原代上皮细胞培养体系 |
| 换液频率 |
每2-3天换液一次 |
| 生长特性 |
贴壁培养 |
| 细胞形态 |
不规则,含足突细胞 |
| 传代特性 |
细胞特性确定传代 |
| 消化液 |
0.25%胰蛋白酶 |
| 培养条件 |
气相: 空气,95%;CO2 ,5% |
质量检测: 澳睿赛实验室分离的人肾足细胞经广谱角蛋白(PCK)或WT-1 (Wilm'sTumorProtein) 免疫荧光染色为阳性,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人肾足细胞体外培养周期有限;建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用PBS清洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;
3)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大,无法机械吹散时,向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中,用吸-管轻轻吹打混匀,37°C温浴2-3min,消化结束后,加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化,用吸管轻轻吹打,分散细胞;1200rpm离心5min,弃上清,收集细胞沉淀;
5)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀;按传代比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和澳睿赛技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考
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