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小鼠结肠黏膜上皮细胞永生化
| 一、细胞基本属性 | |
| 细胞名称 | 小鼠结肠黏膜上皮细胞永生化 |
| 细胞别称 | 小鼠结肠黏膜上皮细胞永生化 |
| 商品货号 | ORCM159A |
| 种属来源 | 小鼠 |
| 年龄性别 | - |
| 组织来源 | 结肠 |
| 生长特性 | 贴壁生长 |
| 细胞形态 | 铺路石状细胞，不规则细胞 |
| 背景简介 | 结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：粘膜（上皮层，固有层，粘膜肌层），粘膜下层，肌层，外膜。结肠黏膜上皮在环境或遗传等多种致癌因素作用下导致结肠癌，是最常见的恶性肿瘤之一。因此，体外培养结肠黏膜上皮细胞为研究进一步结肠癌等疾病提供了前提和基础。 该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。 |
| 生物安全等级 | - |
| 细胞规格 | 1×10^6cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
| 支原体检测 | 无 |
| 培养基 | 小鼠结肠黏膜上皮细胞永生化细胞专用培养基 |
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
| 冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 |
| 倍增时间 | ~24-30小时 |
二、细胞接收后的处理
1) 收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2) 请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 贴壁细胞：细胞在室温中放置1h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4) 细胞运输途中脱落操作方法：把脱落的细胞收集离心后弃上清，用PBS清洗一遍，离心弃上清，在离心管中加入1ml胰酶吹散消化20秒左右，加完全培养基终止消化后离心重新铺平，剩下的贴壁细胞就按照正常贴壁细胞传代方法操作。
5) 备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后 次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
三、细胞培养操作
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b) 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。
c) 轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d) 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
贴壁细胞传代注意点：
l 一定要PBS洗一遍。
l 细胞多观察几次掌握时间，不要在细胞没有基本脱落就终止消化然后吹打下来，这样细胞 更容易分化和死亡。
l 不要一直对细胞吹打
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a) 收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b) 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度1×10^6~1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c) 将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
四、培养注意事项
1) 细胞出现问题，予以重发情况
a) 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
b) 细胞污染问题，请在收到产品3 天内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；
c) 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后2 天后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；
d) 干冰冻存发货的细胞复苏后2天后或常温发货的细胞静置2 小时候并且未开封，出现污染，重发；
e) 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，和每天的细胞照片，核实后予重发；
f) 细胞收到当天以及第2,3 天请拍照，3 天未告知的，视为产品合格。4-7 天内出现问题需提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。
2) 细胞出现问题，不予以重发的情况
a) 客户操作造成细胞污染，不重发；
b) 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；
c) 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
d) 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3 天的细胞状态照片，不重发；
e) 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；
f) 收到细胞并发现问题与客服人员沟通的时间证明大于7 天的，不重发；
g) 视具体情况而定
五、注意事项
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
3. 该细胞仅供科研使用！说明书仅供参考以实际到货说明书为准！
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